芒果中性/碱性转化酶MiNI基因的克隆与表达分析

摘要

采用RT-PCR技术克隆了1个编码NI基因的cDNA序列,命名为MiNI基因,并对不同来源的中性/碱性转化酶的分子特征及系统进化进行比较分析.结果 表明:MiNI基因开放阅读框为2034 bp,编码677个氨基酸,相对分子量为76.6kDa,理论等电点为6.24;生物信息学分析结果显示,NI二级结构α螺旋占38.85％,无规则卷曲占35.45％,伸展链占18.91％,β折叠占6.79％;MiNI具有glycoside hydrolase family 100结构保守域,与克里曼丁桔、龙眼、巴西橡胶树和番木瓜都具有一致的motif位点;MiNI基因编码的氨基酸序列与克里曼丁桔、龙眼氨基酸序列同源性最高;构建NI系统进化树分析表明,与芒果遗传距离最近的是克里曼丁桔,最远的是玉米和枸杞.qRT-PCR分析显示,果皮MiNI基因表达量远高于果肉;花后10～40 d,果皮MiNI基因表达量显著下降﹔花后40～100 d,果皮MiNI基因表达量维持在一个相对稳定水平;花后100～130 d,随着果实成熟,果皮MiN基因表达量又显著上升;而花后10～40 d,果肉MiNI基因表达量显著下降,至果实发育后期果肉MiNI基因表达量始终处于极低水平.该研究为进一步了解MiNI基因在芒果果实蔗糖代谢过程中的作用以及从分子角度阐明芒果糖代谢机理奠定理论和技术基础.