橡胶树胶乳cDNA文库的构建及其EST序列的功能分析

摘要

为了分离和克隆橡胶树胶乳中与胶乳代谢、橡胶生物合成和茉莉酸生物合成等途径相关的功能基因,以橡胶树无性系热研7-33-97品系新开割树的胶乳为材料,用SDS裂解法提取胶乳总RNA,磁珠法纯化mRNA,逆转录合成第1链cDNA,并合成双链cDNA,经电泳检测,双链cDNA的大小主要在1.0～2.0 kb之间,收集大于500 bp的cDNA片段,以DH10B为宿主菌,pBluescriptⅡ为载体,构建未经扩增的橡胶树胶乳cDNA初级文库.该文库的库容大于5.0×105 Pfu/mL,重组率大于90%.随机对文库的3 200个克隆进行了EST测序,用所测序列与GenBank非冗余蛋白质数据库进行BlastX比对,并将比对上的基因进行生物学功能注释和分类.研究结果表明,所构建的胶乳cDNA初级文库质量较高,适合包括低丰度表达基因在内的橡胶树胶乳功能基因的筛选,是研究橡胶树胶乳中重要功能基因的最主要资源和开展橡胶树胶乳代谢与橡胶生物合成的分子机制研究的基础.