长链非编码RNA-核富集转录本1对创伤性脑损伤小鼠的神经保护作用及其可能机制

摘要

目的 探讨长链非编码RNA(IncRNA)核富集转录本1(NEAT1)的表达对创伤性脑损伤(TBI)后神经功能和神经元凋亡的影响及其可能机制.方法 将90只C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假手术组、空白对照组、空载病毒1组和2组及NEAT1上调组和NEAT1下调组,每组15只.构建小鼠控制性皮层撞击(CCI)模型模拟TBI状态,并通过侧脑室内注射腺病毒载体对NEAT1水平进行干预.采用神经功能缺失评分(NSS)及Morris水迷宫试验评估空白对照组、NEAT1上调组和NEAT1下调组小鼠伤后1周内及14～21d时神经功能变化.Western blot检测空白对照组小鼠皮层含死亡结构域的p53诱导蛋白l(Pidd 1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-2、caspase-9和caspase-3在伤后6 h、1,3,7 d 的表达.TUNEL 法检测空白对照组、NEAT1上调组和NEAT1下调组伤后第3天小鼠神经元凋亡情况及免疫荧光半定量分析Piddl的表达及定位.Western blot检测假手术组、空白对照组、空载病毒组、NEAT1上调组及NEAT1下调组小鼠伤后第3天Pidd1、caspase-2、细胞色素c(Cytc)和caspase-3蛋白表达量.结果 与空白对照组[(4.9±1.0)分]比较,NEAT1上调组伤后第1天NSS[(3.5±0.7)分]显著降低(P＜0.01),NEAT1下调组[(5.0±1.5)分]显著升高(P＜0.01).Morris水迷宫试验显示,与空白对照组[(20.1±5.6)s]比较,伤后第19天NEAT1上调组寻找平台时间[(10.9 ±2.8)s]缩短(P＜0.05),NEAT1下调组寻找平台时间[(30.7±6.2)s]延长(P＜0.01).Western blot提示,空白对照组Pidd1、caspase-2、caspase-9和caspase-3在伤后第3天表达明显升高(P＜0.01).通过TUNEL得到伤后第3天NEAT1上调组神经元凋亡率[(18.0 ±2.7)％]明显下降,而NEAT1下调组[(63.0±8.6)％]明显升高(P＜0.01).伤后第3天免疫荧光提示,与空白对照组比较,NEAT1上调组神经元胞质中Pidd1蛋白表达[(22.7 ±2.2)％]减少(P＜0.01),而NEAT1下调组[(72.7±7.0)％]显著增加(P＜0.01).伤后第3天Western blot显示,与空白对照组比较,NEAT1 上调组 Pidd1(0.5 ±0.0)、capsase-2(0.3 ±0.0)、Cyt c(0.5 ±0.0)及 caspase-3(0.4 ±0.0)的表达明显减少(P＜0.01);而NEAT1下调组结果则完全相反.结论 TBI后NEAT1通过调控Pidd1-caspase-2-Cyt c,减少caspase-3活化,抑制神经元凋亡,这可能是TBI后NEAT1保护神经功能的机制之一.