滑膜细胞炎性因子水平及miR-145/MKK4分子轴的关联性

摘要

背景:炎症因子被证明在软骨细胞和双指关节细胞中表达异常,靶向炎症途径可能是治疗骨关节炎的有效策略,但目前鲜有关于滑膜细胞炎症反应的研究报道.目的:探讨99Tc-M DP通过miR-145/MKK4分子轴对滑膜细胞产生炎性因子的影响.方法:①骨关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA细胞)经过不同质量浓度99Tc-MDP药物处理48 h,qRT-PCR实验检测HFLS-RA细胞中miR-145以及炎性因子caspase 1、臼细胞介素1β、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α的表达水平,CCK-8实验检测HFLS-RA细胞存活率;②确定99Tc-MDP干预最佳质量浓度后,将HFLS-RA细胞分为4组:NC组(空白对照组,不经任何处理)、99Tc-MDP组(13 Jg/L99Tc-MDP处理HFLS-RA细胞48 h)、99Tc-MDP+miR-145 inhibitor组(13μg/L 99Tc-M DP处理HFLS-RA细胞48 h同时在细胞中转染miR-145 inhibitor)、99Tc-MDP+miR-145 inhibitor+sh-MKK4组(13 μg/L 99Tc-MDP处理HFLS-RA细胞48 h同时在细胞中转染miR-145 inhibitor+sh-MKK4),qRT-PCR实验检测HFLS-RA细胞中miR-145以及炎性因子caspase 1、白细胞介素1β、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α的表达水平,CCK-8实验检测HFLS-RA细胞存活率.结果 与结论:①99Tc-MDP可显著抑制HFLS-RA细胞炎性因子caspase 1、白细胞介素1β、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α表达和细胞存活率,且半抑制浓度ICs0=13 μg/L;②99Tc-MDP可显著上调HFLS-RA细胞中miR-145的表达,下调MKK4表达(P＜0.01);③miR-145靶向MKK4,且过表达miR-145可显著抑制MKK4的表达;④与99Tc-MDP组相比,99Tc-M DP+miR-145 inhibitor组可显著抑制HFLS-RA细胞中miR-145的表达(P＜0.05),促进细胞中炎性因子的表达(P＜0.05)和细胞增殖(P＜0.05),相比较于99T-MDP+miR-145 inhibitor+sh-MKK4组,99Tc-MDP+miR-145 inhibitor组可明显促进HFLS-RA细胞增殖(P＜0.05)和炎性因子的表达(P＜0.05);⑤结果表明,99Tc-MDP通过miR-145靶向下调MKK4抑制HFLS-RA细胞产生炎性因子,缓解骨关节炎发生.