靶向抑制Molt-4 T细胞增殖的Smo-siRNA：筛选和评价

摘要

背景：研究表明,T淋巴细胞白血病的发生发展与Hedgehog通路的异常有关.Smo基因是该信号通路中的关键基因,控制着Hedgehog信号向细胞膜内的传递.目的：筛选一种可以高效抑制Molt-4细胞株增殖和诱导凋亡的小干扰RNA（Smo-siRNA）.方法：①根据siRNA设计原理,设计并化学合成Smo-siRNA 1,2,3以及无关干扰序列的阴性对照siRNA;②利用NuclefectorTM核转染仪将以上Smo-siRNA分别转入人T淋巴细胞白血病细胞株（Molt-4细胞）,分别在转染24,48,72 h 采用 qRT-PCR 检测 Smo mRNA 相对表达水平,CCK-8法检测细胞生长抑制率, Hoechst33258 染色观察细胞凋亡形态,流式细胞仪（AnnexinV/PI法）检测细胞凋亡率.结果与结论：①利用NuclefectorTM核转染仪成功将Smo-siRNA转入Molt-4细胞,Smo-siRNA 1沉默效果最佳,有效降低Molt-4细胞Smo mRNA表达水平（P 〈 0.05）,并且以48 h作用效果最明显;②转染后24 h, Smo-siRNA可明显抑制Molt-4细胞生长（P 〈 0.05）;③Hoechst染色证实Molt-4细胞符合凋亡的细胞形态学变化;④与对照组比较,Smo-siRNA1组细胞的凋亡率明显增加（P 〈 0.05）;⑤结果表明,小干扰RNA下调Molt-4细胞Smo基因表达可明显抑制Molt-4细胞增殖,并促进凋亡,提示Smo-siRNA具有作为T细胞白血病靶向基因治疗或者协同治疗的潜能.