构建中国汉族人亚健康状态肾阴虚证的DNA消减文库

摘要

目的:采用抑制性消减杂交技术构建汉族人亚健康状态肾阴虚证DNA消减文库.方法:实验于2004-02在南方医科大学南方医院糖尿病分子实验室完成.样本来源于南方医科大学南方医院汉族亚健康且中医辨证为肾阴.虚证的患者1例及健康自愿者1名作为其对照组.用硅胶法抽提血白细胞DNA,用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将聚合酶链反应产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用聚合酶链反应方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建亚健康肾阴虚证DNA消减文库.结果:用抑制性消减杂交方法筛选出了亚健康肾阴虚证的差异DNA片段,得到680个白色克隆,随机调取96个白色克隆,再经聚合酶链反应方法快速筛选出阳性重组质粒91个,从而成功地构建了亚健康肾阴虚证的DNA消减文库.结论:抑制性消减杂交技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建亚健康肾阴虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆亚健康肾阴虚证相关基因奠定了基础.