血管内皮细胞生长因子基因体外转染小鼠NIH3T3细胞的生物活性

摘要

目的:用基因工程方法改造成纤维细胞,使其分泌血管内皮细胞生长因子,观察成纤维细胞作为基因转染的靶细胞的可行性.方法:实验于2005-11在解放军第四军医大学西京医院全军整形外科研究所完成.PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒的扩增、提取、纯化和鉴定后,将培养14 d细胞融合约80%的小鼠NIH3T3细胞在24孔板中进行转染,细胞随机分为3组,每组10孔,分别为PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组.采用免疫组织化学化学检测血管内皮细胞生长因子表达.ELISA方法检测血管内皮细胞生长因子外分泌.四甲基偶氮唑盐法检测小鼠NIH3T3细胞对PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染的敏感性.结果:①PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒的基因测序结果显示序列正确.②免疫组织化学染色显示:小鼠NIH3T3细胞转染4 d后胞浆内可观察到阳性表达产物,对照组呈阴性结果.③ELISA检测结果:小鼠NIH3T3细胞转染14 d后,PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组3组培养上清中血管内皮细胞生长因子浓度分别346±23,0,0 ng/L(P＜0.05).④四甲基偶氮唑盐法检测结果:PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组所测的490 nm的A值比较差异均无显著性(依次为0.96±0.11,0.91±0.10,0.98±0.16,P＞0.05).PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染对小鼠NIH3T3细胞增殖无影响.结论:小鼠NIH3T3细胞可作为血管内皮细胞生长因子基因转染的靶细胞,用于基因治疗.