转录因子NF-κB和E2F的decoy寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞的增殖

摘要

目的:探讨转录因子NF-κB和E2F的decoy寡核苷酸单独或联合应用对猪血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法:实验于2004-05/2005-08在瑞金医院内科实验室完成。①原代培养小型猪胸主动脉平滑肌细胞,体外合成转录因子NF-κB和E2F的decoy寡核苷酸,将细胞分为6组:正常对照组、NF-κBdecoy寡核苷酸组、E2Fdecoy寡核苷酸组、NF-κB+E2Fdecoy寡核苷酸组、NF-κB错配寡核苷酸组、E2F错配寡核苷酸组,以脂质体为载体转染细胞,采用激光扫描共聚焦显微术观察FITC标记的寡核苷酸细胞内定位情况。②各组细胞经同步化处理后,予体积分数为0.1的胎牛血清刺激,采用四甲基偶氮唑盐法检测NF-κB和E2F的decoy寡核苷酸对细胞增殖的抑制作用。③免疫印迹法检测增殖细胞核抗原表达水平。④流式细胞仪碘化丙啶法及磷脂结合蛋白V法分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果:①FITC标记的寡核苷酸主要聚集于细胞核内,转染效率为(46.67±5.77)%。②体积分数为0.1的胎牛血清刺激24h后,NF-κBdecoy寡核苷酸组、E2Fdecoy寡核苷酸组和NF-κB+E2Fdecoy寡核苷酸组均可明显抑制细胞增殖犤(34.96±6.35)%,(38.75±0.14)%,(49.60±5.07)%犦,并且decoy寡核苷酸组抑制作用普遍强于错配寡核苷酸组,联合应用组作用强于单独应用组(P<0.01)。胎牛血清刺激48h后NF-κBdecoy寡核苷酸组和NF-κB+E2Fdecoy寡核苷酸组仍可明显抑制细胞增殖犤(36.35±5.24)%,(42.60±4.21%)犦,但E2Fdecoy寡核苷酸组增殖反而超过正常对照组犤(-24.22±9.68)%犦(P<0.01)。③胎牛血清刺激24h后NF-κB和E2F的decoy寡核苷酸单独或联合应用组均可降低增殖细胞核抗原的表达。④decoy寡核苷酸使停滞在DNA合成前期的细胞百分数增加,早期凋亡增加。结论:在原代培养的猪的血管平滑肌细胞,NF-κBdecoy寡核苷酸和E2Fdecoy寡核苷酸单独或联合应用可以抑制细胞增殖,但E2Fdecoy寡核苷酸单独应用只能短期抑制细胞增殖,decoy寡核苷酸抑制作用主要是通过阻碍细胞周期进程、促进细胞凋亡实现的。