抗菌肽Cecropin A基因原核表达及表达产物的鉴定(英文)

摘要

背景:Cecropins是一种具有抗菌活性的小分子蛋白质。采用真核细胞表达或人工合成Cecropins,效率低、成本高。目的:克隆表达家蝇抗菌肽基因Cecropin A,并对其重组表达产物进行鉴定。方法:依据GenBank中家蝇Cecropin A基因序列设计特异性引物,用RT-PCR从家蝇幼虫组织中扩增Cecropin A成熟肽基因,将其克隆入原核表达载体pET32a中,与表达载体中的Thioredoxin基因构成融合基因,并转化E.coli BL21。经异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导表达。采用家蝇幼虫血淋巴免疫家兔获得抗血清;Western blot和三羟甲基氨基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定诱导的重组蛋白质。结果与结论:经异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导,E.coliBL21可表达Cecropin A成熟肽,兔抗家蝇幼虫血清、三羟甲基氨基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot结果证实表达产物为Cecropin A成熟肽。说明使用原核表达系统可以获得天然Cecropin A成熟肽。