甲状旁腺素相关蛋白亚基因对骨骺干细胞的调控

摘要

背景：甲状旁腺素相关蛋白-印第安刺猬蛋白两者相互作用调节着骨骺区软骨的分化成熟及增殖,促使骨骺区细胞处于一种相对稳定的状态。目的：分析甲状旁腺相关蛋白亚基因PTHrP（1-36）、PTHrP（38-94）和PTHrP（107-139）对骨骺干细胞的调控作用以及PTHrP（107-139）与其他调控因子的影响。方法：用脂质体介导的基因转染技术将质粒pTRE-PTHrP（1-36）、pTRE-PTHrP（38-94）和pTRE-PTHrP（107-139）分别转染pTet-on骨骺干细胞株,放入诱导分化培养基中进行培养,加入1mg/L的强力霉素进行诱导,以RT-PCR的方法检测增殖细胞核抗原基因的表达变化。再次将质粒pTRE-PTHrP（107-139）转染pTet-on骨骺干细胞株,加入不同浓度的强力霉素进行诱导,应用RT-PCR的方法检测Ⅱ型胶原、X型胶原、印第安刺猬蛋白、Ptc、Sox9、骨形态发生蛋白6基因的表达变化。结果与结论：强力霉素诱导的质粒pTRE-PTHrP（107-139）转染组的增殖细胞核抗原表达明显高于质粒pTRE-PTHrP（1-36）转染组和质粒pTRE-PTHrP（38-94）转染组;在强力霉素诱导的质粒pTRE-PTHrP（107-139）转染组中Ⅱ型胶原、Sox-9表达明显增强,Ihh表达未见明显变化,而Ptc、X型胶原、骨形态发生蛋白6表达明显降低。而且其表达量与强力霉素存在剂量依赖性。提示PTHrP（107-139）可能是通过调控Sox-9、Ptc、骨形态发生蛋白6的表达来促进骨骺干细胞增殖并抑制其分化的,而PTHrP（1-36）、PTHrP（38-94）对前癌干细胞的增殖并无明显作用。pTet-on质粒系统在前癌干细胞能有效的调控外来基因的表达。