慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染的人脐静脉内皮细胞

摘要

背景：人脐静脉内皮细胞转染慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白方便后期示踪该细胞，掌握转染的最佳感染复数（MOI）和产生较强荧光强度的时间，可为后期观察人脐静脉内皮细胞在动物模型体内的示踪奠定基础。 目的：观察慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白在人脐静脉内皮细胞中的表达，找到稳定标记人脐静脉内皮细胞的方法。 方法：采用胶原酶灌注消化分离人脐静脉内皮细胞，将其置于含有体积分数20%胎牛血清、内皮细胞生长因子的培养基内培养，倒置显微镜观察内皮细胞生长情况，消化离心重悬后进行计数，平均分成4组，每组细胞数5.0×105个，接种于24孔培养皿，空白组加入10μL的DMEM无血清培养基，剩余3组加入慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白进行转染，MOI分别为2，3，4，每组3个皿。 结果与结论：分离的人脐静脉内皮细胞在体外培养5-7d可长成单层，光镜下胞体为单层鹅卵石状排列，第Ⅷ因子相关抗原的检测为阳性。转染后24 h可见绿色荧光，72 h荧光达到最强，细胞转染率与MOI值呈线性增长关系，至21 d 时仍可见绿色荧光。转染后0，7，14，21 d，MOI=3组的人脐静脉内皮细胞数量均与空白组差异无显著性意义，表明转染后细胞增殖能力不受慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白影响。提示慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染人脐静脉内皮细胞效率高，绿色荧光蛋白基因可持续表达21 d，且标记后不影响人脐静脉内皮细胞的增殖活性。