人脐静脉内皮细胞分离与冻存技术及Gore-Tex人工血管内皮化

摘要

目的体外分离人脐静脉内皮细胞,进行冷冻保存,并采用冻存脐静脉内皮细胞,复融后体外扩增培养,种植于Gore-Tex表面,进行人工血管内皮化.方法脐静脉内灌注消化液分离内皮细胞,所获内皮细胞体外培养,经免疫荧光染色及扫描电镜检查,鉴定所获内皮细胞及其纯度;采用梯度降温法,冻存内皮细胞,经复苏后,进行形态学检查,以台酚蓝试验、四氮唑盐(MTT)试验、流式细胞术细胞凋亡检测等方法鉴定细胞生物特性;冻存脐静脉内皮细胞体外培养扩增后,种植于Gore-Tex材料上,并行扫描电镜观察.结果血管内灌注消化液法可获取高纯度的内皮细胞;与新鲜细胞相比,复苏的内皮细胞活力保持在95%以上;复苏后的内皮细胞HE染色及生长曲线与新鲜细胞差异无统计学意义.冻存内皮细胞的凋亡率较新鲜内皮细胞高,但无统计学差异.冻存内皮细胞成功种植于Gore-Tex材料上,细胞生长良好,覆盖于大部分Gore-Tex表面.结论冻存内皮细胞作为种子细胞对人工血管内皮化具有可行性.脐静脉灌注酶消化法可获取足够数量及纯度的内皮细胞.冻存的内皮细胞复苏后无明显形态学改变,并保持较高的活力及体外增殖能力,可作为种子细胞来源.