大鼠牵张性脊髓损伤后细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

摘要

目的观察大鼠牵张性脊髓损伤后细胞凋亡现象,检测脊髓损伤后凋亡相关基因的表达.方法大鼠脊髓T13～L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位(CSEP)监测P1-N1波幅下降至术前波幅70%后,分别于术后30 min、6 h、1、4、7、14、21 d处死大鼠,取材(n=4).应用流式细胞仪、原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术观察脊髓细胞凋亡情况,用免疫组化检测p53、bax和bcl-2的表达.结果流式细胞仪及TUNEL法检测显示,损伤组术后6 h凋亡细胞开始增多,术后7 d细胞凋亡率达高峰,随后开始回落,持续21 d,与空白对照组及椎板切除组比较,差异有显著性意义(P<0.05,0.01).TUNEL法染色显示,白质中出现大量胶质细胞凋亡.免疫组化染色显示:损伤组术后6 h开始,p53、bax和bcl-2阳性表达开始增多,p53阳性细胞数术后4 d达高峰,bax 和bcl-2术后7 d达高峰,损伤组各时相点的阳性表达与空白对照组与椎板切除组比较差异有显著性意义(P<0.05,0.01).结论牵张性脊髓损伤后存在细胞凋亡现象,从形态上看包括神经元和胶质细胞凋亡,细胞凋亡是牵张性脊髓损伤继发损害中细胞死亡的一种重要形式,也是继发损伤期的重要病理变化.凋亡相关基因 p53、bax大量表达,可能在脊髓细胞凋亡过程中起重要作用.