水稻根尖质膜蛋白质组学研究方法的建立

摘要

以徐稻3号水稻苗期幼嫩根尖为材料,利用葡聚糖/聚乙二醇两相分配法纯化得到纯度达 90% 的质膜组分,使用优化的双向电泳水化液溶解质膜蛋白,通过等电聚焦/十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳 (IEF/SDS-PAGE)分离和基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)分析,鉴定了31个水稻质膜相关蛋白.结果表明IEF/SDS-PAGE 双向电泳适合分离亲水性相对较高的膜附着蛋白.进一步利用高盐和温和去污剂对纯化的质膜进行洗涤,以降低质膜组分的复杂程度,通过 SDS-PAGE 单向电泳分离和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析,鉴定了 8个质膜蛋白.经洗涤后的质膜组分复杂度显著降低,SDS-PAGE 中的蛋白条带只包含1～2 种蛋白,且主要为疏水性较强的穿膜蛋白,说明多种生物化学分离方法及不同质谱分析的综合运用,是解决生物膜蛋白质组学难点的有效途径.