电针调控microRNA-34a对缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞分化的影响

摘要

目的 探讨电针曲池和足三里是否是通过调控microRNA-34a(miR-34a)促进缺血再灌注损伤大鼠缺血周边区神经干细胞分化为星形胶质细胞.方法 将108只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组再分为3 d、7 d、14 d 3个时间点,每个时间点12只.另取16只大鼠随机分为电针+二甲基亚砜(DMSO)组(n=8)和电针+miR-34a抑制剂组(n=8).构建大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)致局灶性脑缺血模型.电针组造模后第2天进行电针患侧肢体曲池(LI11)、足三里(ST36),疏密波1/20 Hz,以肢体轻轻抖动为度,每次30 min,每天1次,共14 d.同时,造模后第2天至第14天各组大鼠腹腔注射5-溴代-2'-脱氧尿苷(BrdU),每天2次,每次注射间隔8 h;DMSO溶解液、miR-34a抑制剂在造模前进行侧脑室注射;免疫荧光染色检测BrdU、巢蛋白(Nestin)与神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的共定位情况;逆转录实时定量聚合酶链反应检测缺血周边区miR-34a相对表达量.结果 电针组各时间点Longa神经行为学评分低于模型组(t>2.084,P<0.05).模型组患侧肢体的爪印面积(右前爪、右后爪)、最大压强(右前爪、右后爪)与同时间假手术组比较均下降(P<0.05),模型组随着时间延长右后爪印面积增加(P<0.05).电针组患侧肢体的爪印面积(右前爪、右后爪)与同时间模型组比较增加(P<0.05).电针干预3 d和7 d后,电针组患侧最大压强(右前爪、右后爪)与模型组比较无显著性差异(P>0.05);14 d后电针组大于模型组(P<0.05).电针干预3 d至7 d,电针组右后爪印面积与右前最大压强逐渐增加,一定程度上呈时间依赖性(P<0.05).模型组和电针组缺血周围区均表达Nestin+/GFAP+细胞和BrdU+/GFAP+细胞,且电针组3 d、7 d和14 d后Nestin+/GFAP+、BrdU+/GFAP+双阳性共标的细胞较模型组表达均增加(t>3.292,P<0.05),且在7 d达到峰值.脑缺血7 d后模型组缺血周边区miR-34a的表达较假手术组明显增加(P<0.01);而电针组和+DMSO组miR-34a表达进一步升高(P<0.05);电针+miR-34a抑制组miR-34a表达和BrdU+/GFAP+细胞数较电针组均减少(P<0.05).结论 电针曲池和足三里可以促进缺血再灌注损伤大鼠缺血周边区神经干细胞分化为星形胶质细胞,可能是通过调控miR-34a的表达.