小鼠骨髓间充质干细胞的分离及其诱导定向脂肪细胞分化

摘要

目的 建立小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和鉴定方法,稳定和优化骨髓MSCs在体外定向向脂肪细胞分化的适宜诱导条件.方法 采取贴壁细胞分离法分离和纯化小鼠骨髓MSCs;选用第5代MSCs分别采用CFU-f培养法和CFU-f集落再克隆生成CFU-f集落法鉴定MSCs的增殖和自我更新能力;利用不同组合的成脂培养基定向诱导MSCs分化为脂肪细胞;利用油红O免疫组化染色鉴定分化后的细胞.结果 分离和纯化的小鼠骨髓MSCs呈均匀有序的成纤维母细胞样形态;植入2×103～1×105MSC细胞/皿时,可生成不同比例的纯的CFU-f集落,且数量与种入的细胞数呈良好的线性关系;小型CFU-f集落再克隆生成CFU-f集落的能力较弱,而大型CFU-f集落具有较高的再克隆生成CFU-f集落的能力,再克隆生成CFU-f集落率高达90%,而且1个目的集落可再克隆生成多个CFU-f集落;不同诱导方案均可诱导MSC生成脂肪细胞,而合用地塞米松(DM)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、胰岛素(IS)和消炎痛(ID)时效果最佳,诱导MSC生成脂肪细胞的效率可高达96%以上,且生成的细胞绝大多数为成熟脂肪细胞.结论 采取贴壁细胞分离法经过长期传代可得到纯化的小鼠骨髓MSCs,MSCs具有高度增殖、自我更新和定向分化为脂肪细胞的能力;DM、IBMX、IS和ID 4种诱导剂合用可诱导96%以上的该细胞定向分化为成熟脂肪细胞.