辐射联合外源性野生型p53基因对不同p53状态的黑色素瘤细胞系的生物学效应

摘要

目的研究辐射结合腺病毒（AdCMV）载体介导的p53基因转导对不同p53状态的人黑色素瘤细胞系基因转移效率、凋亡和辐射敏感性的影响。方法用复制缺陷的重组腺病毒载体（AdCMV-p53）介导人p53基因转导1GyX射线预照射的黑色素瘤细胞系A375（wtp53）和WM983a（mup53）,RT-PCR检测mRNA水平,流式细胞仪测定细胞周期阻滞及外源性P53蛋白表达情况,Tunel法检测细胞凋亡,克隆形成率测定辐射后细胞存活率。用携带报道基因的复制缺陷重组腺病毒载体AdCMV-GFP作为对照。结果1GyX射线照射可较高地增加AdCMV-p53对A375和WM983a细胞系的基因转导效率,转导的外源性野生型p53可在两种细胞中高效表达,并诱导细胞周期G1期阻滞;单纯转导p53对A375（wtp53）细胞无明显诱导凋亡和生长抑制效应,但可部分诱导WM983a（mup53）细胞凋亡;而转导p53基因48h后给予X射线辐射,两种细胞的克隆存活率较其对照组均明显减低,外源性p53基因对WM983a（mup53）细胞的辐射增敏作用较A375（wtp53）细胞明显。结论外源性野生型p53基因过表达可增加黑色素瘤细胞系A375和WM983a的辐射敏感性,但对WM983a细胞系的辐射增敏作用高于A375细胞系。表明p53是基因治疗黑色素瘤较好的候选基因。