表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建

摘要

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ鸡胚尿囊毒ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ扩增完整的ＮＡ ｃＤＮＡ基因，将其克隆到载体ｐＳＹ５３８中的禽痘病毒早晚期启动子 ＬＰ２ＥＰ２的下游，然后再将含有启动子的 ＮＡ基因片段亚克隆到已有的ＡＩＶＨＡ基因重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＬａｃＺ）中，构建了ＨＡ、ＮＡ双重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＮＡ＋ＬａｃＺ），将它与禽痘病毒疫苗株Ｓ－ＦＰＶ－０１７共转染鸡胚成纤维细胞，在Ｘ－ｇａｌ存在的条件下，经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、ＰＣＲ鉴定等，结果表明已获得一株能同时稳定表达ＨＡ和ＮＡ蛋白的重组禽痘病毒，为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。