一株多重耐药大肠杆菌耐喹诺酮gyrA基因突变的研究

摘要

临床获得1株鸡致病性大肠杆菌CE01,进行药敏、质粒转化、耐药质粒消除试验,结果该菌对11种受试抗菌药物全部呈高度耐药,其中氧氟沙星的MIC≥50ug/ml,且含有喹诺酮抗性质粒,溴化乙淀和黄连素作为消除剂作用48小时可使其喹诺酮抗性质粒消除,耐药水平显著下降.聚合酶链反应(PCR)扩增该菌gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR),质粒DNA和染色体DNA均可扩增出长度为668bp的PCR产物片段.经测序分析,两者基因序列相同率为98.17%,相同位点突变相同的碱基有5个,相同位点突变不同的碱基有2个;与基因数据库Swanberg等报道的大肠杆菌gyrA基因相应序列比较,该菌质粒DNAPCR产物同源率97.8%,有13个位点发生突变,3个氨基酸被替换;染色体DNA PCR产物同源率98%,有12个位点发生突变,2个氨基酸被替换.用放射性同位素α-32P分别标记CE01菌株染色体DNA和质粒DNA的PCR扩增片段制备探针,对CE01菌株进行检测.质粒DNA和染色体DNA分别与质粒探针和染色体探针杂交出现典型的阳性杂交斑.证实该菌株质粒和染色体上同时存在耐喹诺酮gyrA突变基因,对喹诺酮的耐药性是质粒介导和染色体突变共同作用的结果.