口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达

摘要

设计、合成FMDV非结构蛋白3B基因的PCR引物,并在引物5'端和3'端分别加入含BamH I和Hind Ⅲ限制性酶切位点序列.以FMDV基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3B基因,得到的基因片段经BamH I/Hind Ⅲ双酶切后与转座载体pFASTBAC HTa连接,转化宿主菌DH10BAC,在含庆大霉素、卡那霉素、X-gal、IPTG的LB平板上37℃培养24h,提取白色菌落,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒,病毒经传代扩增后感染High 5细胞,表达目的蛋白--FMDV非结构蛋白3B.SDS-PAGE及Western Blot结果显示,本研究成功构建了Bacmid-3B重组表达载体,并在昆虫细胞中表达了NSP-3B蛋白,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应.