应用体外重组PCR技术构建鸡单链抗体基因的研究

摘要

用异硫氰酸胍与β-巯基乙醇联合变性的方法,从罗曼鸡脾脏中提取总RNA, RNA样品经紫外检测后,A230=0.0715,A260=0.1518,A280=0.0793;根据莱航鸡免疫球蛋白的轻、重链可变区基因的骨架区1和骨架区4的序列,分别设计一对引物,通过反转录-PCR方法,分别扩增出了罗曼鸡的轻、重链可变区基因,1.5 %的琼脂糖凝胶电泳图谱显示其大小分别约为360 bp和420 bp;以VL和VH为模板,借助重组PCR手段,构建了VL-Linker-VH形式的鸡单链抗体,1.5 %的琼脂糖凝胶电泳图谱显示出一条约780 bp区带.为进一步构建鸡的噬菌体抗体库和筛选特异性的鸡单链抗体打下了基础.