马立克氏病病毒CV1988株pp24基因的克隆与表达

摘要

根据马立克氏病病毒(MDV)国际参考强毒GA株pp24基因序列,设计和合成了一对引物,其两端分别含SalⅠ和EcoRⅠ的酶切位点.以CV1988株基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增其pp24基因.PCR产物经纯化后,按正确的阅读框架定向克隆到表达性载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,并用序列测定验证.将重组质粒转化的大肠杆菌BL21,在1.0mM IPTG和37℃条件下诱导,GST-pp 24基因获得了表达.诱导菌体的裂解物经12%的SDS聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)和Westemblot试验验证,得到大小为43kD的融合蛋白,与预期大小一致.将该融合蛋白的凝胶带切下研碎后免疫小鼠三次后,其血清与MDV感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)在间接免疫荧光试验中呈阳性反应.