检测肠炎沙门氏菌ELISA方法的建立与应用研究

摘要

从已建立的抗沙门氏菌单抗中筛选出适用于肠炎沙门氏菌ELISA检验的3-47-26单抗,采用筛选强阳性杂交瘤细胞株制备了高效价的3-47-26单抗.改进用辣根过氧化物酶标记高效价单抗的方法,进行了HRP标记单抗的免疫生物学特性的鉴定.确定了包被浓度和酶标抗体的工作浓度:HRP-3-47-26为1:100;LPS的包被浓度为400 ng/mL.试验中采用LPS与多聚赖氨酸的结合,解决了包被过程中的解吸附作用,增强了包被的稳定性,同时也减少了假阳性反应,优化了包被过程.建立了检测肠炎沙门氏菌的抗原竞争ELISA方法,利用样品中的LPS抑制酶标抗体与包被的LPS结合,以降低底物反应的颜色从而达到检测的目的.通过对210份肠炎沙门氏菌感染鸡泄殖腔棉拭子、羽毛和组织样品先筛选后鉴定的方法进行检测具有明显的抑制作用,通过与国标法对大量的样品检测结果比较表明,竞争ELISA方法的检出率为18.09%;检出阳性样品36份,国标法检出率为17.14%;两者符合率为97.14%.竞争ELISA敏感性和特异性分别为94.4%和97.7%.从而为肠炎沙门氏菌的检测提供了一种敏感、特异的检测方法.