链球菌GapC蛋白的表达及其多克隆抗血清的制备

摘要

本研究对乳房链球菌GapC蛋白基因进行了克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性试验.应用PCR技术直接从临床分离的乳房链球菌菌株基因组中扩增出GapC蛋白基因,并将其克隆至pET28a(+)上,转化大肠杆茵BL21(DE3)中表达.经DNA序列测定分析,扩增出的基因与GenBank发表的乳房链球菌GapC基因序列AF421900的同源性为99.8%,氨基酸同源性为100%;与GenBank发表的无乳链球菌GapC基因序列AF421899的同源性为91.4%;与停乳链球菌GapC基因序列AF375662的同源性为88.9%.表达的融合蛋白通过MagneHisTM蛋白纯化试剂盒纯化,纯化蛋白免疫小鼠3次,制备GapC抗血清.本研究表达和纯化了乳房链球菌GapC蛋白,并制备出鼠抗血清,为下一步开展GapC重组蛋白的应用研究莫定了基础.