马泰勒虫荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

为建立马泰勒虫(T.equi)敏感、快速的定量检测方法,本研究根据GenBank中登录的T.equi 18SrRNA保守序列设计一对特异性引物和TaqMan探针,经过反应体系及条件优化,建立了T.equi荧光定量PCR检测方法.结果显示,该方法的灵敏度可达10拷贝/μL,比普通PCR灵敏度高1 000倍;该方法可以特异地检测T.equi,对马驽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫与牛环形泰勒虫的检测均为阴性;组内及组间重复试验变异系数均小于3％.对50份临床样品进行检测,荧光定量PCR的阳性检出率为40％,常规PCR的阳性检出率仅为34％.该检测方法的建立为T.equi的流行病学调查和实验研究提供了一种敏感特异的定量检测方法.