驽巴贝虫和马泰勒虫双重PCR检测方法的建立

摘要

目的建立驽巴贝虫(Babesia caballi)和马泰勒虫(Theileria equi)的双重PCR检测方法。方法根据Gen Bank发表的驽巴贝虫裂殖子m RNA BC48基因保守序列和马泰勒虫核糖体小亚基18 s r RNA基因保守序列,设计、合成2对特异性引物,经优化反应条件,建立双重PCR检测方法,并检测该方法的特异性和敏感性。用该双重PCR法对采集于伊犁地区马疑似病例全血样品进行检测,并与镜检法、常规PCR和荧光PCR的结果进行比较。结果建立的双重PCR法可特异性地扩增驽巴贝虫和马泰勒虫的相应目的条带,分别长约155 bp和280 bp,而对其他种属的双芽巴贝虫(B.bigemina)、环形泰勒虫(T.annulata)、瑟氏泰勒虫(T.sergenti)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、犬新孢子虫(Neospora caninum)和伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)进行扩增未见相应片段。该方法对驽巴贝虫和马泰勒虫的最低检出浓度分别为4.85×105拷贝/μl和4.85×104拷贝/μl。对采集的24份疑似血样进行双重PCR扩增,驽巴贝虫的阳性率为45.8%(11/24),马泰勒虫的阳性率为75.0%(18/24),镜检法、常规PCR和荧光PCR与双重PCR检测的符合率分别为91.7%(22/24)、95.8%(23/24)和95.8%(23/24)。结论建立了可同时检测驽巴贝虫和马泰勒虫的双重PCR方法。