双酚A等化学物对耗尽内源性雌激素诱导T47D细胞凋亡的影响

摘要

目的在乳腺癌细胞株T47D细胞内采用雌激素耗尽的方法诱导其发生凋亡,然后观察对-壬基酚(n-4-noniphenol,NP)、双酚A(bisphenol A, BisA)和邻苯二甲酸酯二丁酯(dibutylphthalate,DBP)对这种凋亡的影响,探讨环境雌激素是否能够抑制雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用.方法 T47D细胞在达克尔培养液(DMEM,含10%小牛血清)中进行常规传代培养,于实验前4 d将细胞用磷酸盐缓冲盐水洗涤后改为在无酚红DMEM培养,目的是耗尽细胞内源性雌激素.实验设溶剂对照、雌激素对照(E2)、抗雌激素他莫昔芬(TAM)对照及3个试验组,采用流式细胞术,琼脂糖凝胶电泳和HE染色镜检观察环境雌激素对雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡的影响.结果流式细胞仪分析结果表明,雌激素耗尽能够诱导T47D细胞发生凋亡,凋亡率为34.5%,此时往培养液中分别加入32×10-7 mol/L NP和32×10-7mol/L BisA,对细胞处理72 h,可显著抑制细胞凋亡作用(凋亡率分别变为20.1%和16.5%);琼脂糖凝胶电泳显示,细胞凋亡特有的DNA-ladder消逝;HE染色镜检表明,细胞出现活跃核分裂相.加入5×10-7mol/L TAM可加重细胞的凋亡现象(细胞凋亡率为55.6%).结论 NP和BisA均可抑制雌激素耗尽所诱导的T47D细胞的凋亡作用;DBP对凋亡的抑制作用不明显.环境雌激素有可能影响细胞凋亡信号传导途径.