SET基因缺陷对三氯乙烯诱导人正常肝细胞DNA甲基化水平改变的影响

摘要

目的比较三氯乙烯（trichloroethylene）诱导人正常肝细胞（L-02细胞）和SET基因缺陷L-02细胞（SET缺陷细胞）中DNA甲基化相关指标的变化,探讨SET与三氯乙烯诱导的表观遗传调控作用之间的关系。方法选用前期建立的SET缺陷细胞为研究对象,使用三氯乙烯分别对L-02细胞和SET缺陷细胞进行处理,检测细胞增殖水平、细胞DNA甲基化水平和DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases,DNMTs）活性的变化,通过Western blot法从蛋白水平分析DNMTs（DNMT1、DNMT3a、DNMT3b）的表达变化。结果三氯乙烯处理L-02细胞和SET缺陷细胞24 h后,两种细胞的增殖水平均呈现下降趋势。使用0、1.0、2.0、4.0和8.0 mmol/L的三氯乙烯处理细胞后,L-02细胞的相对增殖水平分别为100.00±2.70、83.34±2.38、75.56±4.51、71.67±2.77、66.67±1.63（F=58.29,P＜0.001）;SET缺陷细胞的相对增殖水平分别为101.12±1.67、85.01±2.33、79.44±1.67、78.337±3.89、76.11±3.33（F=42.41。P＜0.001）。0、1.0、2.0、4.0和8.0 mmol/L的三氯乙烯处理L-02细胞和SET缺陷细胞24 h后,L-02细胞的DNA甲基化水平分别为3.77±0.08、3.48±0.08、3.38±0。10、3.14±0.15、2.91±0.07,呈下降趋势（F=212.87,P＜0.001）;SET缺陷细胞DNA甲基化水平分别为3.77±0.15、3.57±0.15、3.30±0.11、3.35±0.13呈下降趋势（F=79.32,P＜0.001）。L-02细胞经0、1.0、2、0、4.0、8.0 mmol/L的三氯乙烯处理24 h后,DNMT1蛋白的相对表达量分别为1.00±0.03、1.28±0.04、1.20±0.04、1.62士0.05、1.43±0.04,表达升高（F=103.00,P＜0.001）;而在SET缺陷细胞中DNMT1的相对表达量分别为1.00±0.04、0.96±0.02、1.19±0.05、0.85±0.03、0.83±0.03,出现下降（F=44.18,P＜0.001）。结论 SET缺陷可以明显抑制三氯乙烯暴露引起的L-02细胞增殖水平及DNMTs活性的下降,改变DNMT1表达水平的变化趋势,提示SET参与了在三氯乙烯诱导下的肝毒性作用和表观遗传学调控机制。