弓形虫表面抗原P22的重组体构建及临床应用研究

摘要

目的 克隆并构建pGEX-4T-1-P22重组表达载体,获取纯化的P22蛋白,为进一步研究P22的生物学特性和免疫保护作用奠定实验基础.方法 应用PCR技术扩增P22基因片段,连接到载体中,诱导并纯化P22蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,并组装成弓形虫IgM抗体酶联免疫(ELISA)试剂盒,并与进口试剂盒对比.结果 成功构建了重组质粒pGEX-4T-1-P22,并得到分子量在43KD的大量表达蛋白,具有良好的抗原性,将该蛋白组装成ELISA试剂盒检测IgM抗体,与意大利SORIN试剂盒对比检测450份临床血清,阴阳性符合率分别为92.16％和88.06％,总的符合率为88.89％.结论 高效表达纯化的P22重组蛋白抗原性强,利用其建立的IgM ELISA试剂盒与进口试剂盒对比,具有较高的灵敏度和特异性,可用于检测弓形虫抗体.