氧化应激及相关通路在人增生性瘢痕与正常皮肤组织成纤维细胞中的表达差异

摘要

目的 研究人增生性瘢痕与正常皮肤组织成纤维细胞中氧化应激程度及相关通路的表达是否存在差异.方法 选取并收集2019年6月至2020年7月期间就诊于解放军总医院第四医学中心烧伤整形医学部接受手术切除治疗的8例增生性瘢痕患者的瘢痕组织及供皮区正常全层皮肤组织,其中男5例,女3例,年龄(35.0±11.7)岁.组织块法提取培养原代成纤维细胞,并传代培养,待细胞传代至第3代进行以下实验:(1) CCK-8法检测增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)和正常皮肤成纤维细胞(NSF)的增殖能力;(2)流式细胞术检测HSF和NSF中活性氧含量;(3)比色法检测2种细胞内总超氧化物歧化酶(SOD)相对活力值;(4) RT-PCR检测2种细胞中NQO1基因表达量;(5)RT-PCR检测2种细胞中Nrf2基因表达量;(6)蛋白质印迹法检测2种细胞中Nrf2和Bcl2蛋白含量;(7)细胞免疫组织化学染色检测Nrf2在2种细胞中的表达分布情况.结果 采用SPSS 25.0统计软件分析,行独立样本t检验,P＜0.05表示差异有统计学意义.结果 (1)与NSF比较,HSF的生长速度更快,2种细胞的细胞数量从第3天起差异有统计学意义(统计结果从3～7d依次为t=2.631,P=0.039;t=7.025,P＜0.001;t=5.031, P＜0.001;t=4.241, P=0.002;t=6.525, P=0.003);(2) HSF组中活性氧含量为75.39％±3.06％,明显高于NSF组的45.36％±3.66％,两者比较差异有统计学意义(t=-17.804,P＜0.001);(3)HSF组SOD活力值为(50.76±0.52) U/ml,比NSF组的(42.76±1.35) U/ml升高,两者比较差异有统计学意义(t=15.674,P＜0.001);(4)HSF组中NQO1mRNA相对表达量为0.859±0.076,比NSF组的1.595±0.181降低,两者比较差异有统计学意义(t=3.763,P=0.020);(5)HSF组中Nrf2mRNA相对表达量为0.590±0.055,相较于NSF组的1.595±0.146降低,两者比较差异有统计学意义(t=6.445,P=0.003);(6) HSF组的Nrf2蛋白相对含量为0.314±0.035,相较于NSF组的0.912±0.039明显降低,两者比较差异有统计学意义(t=22.554,P＜0.001);HSF组的Bcl2蛋白相对含量为0.466±0.020,相较于NSF组的0.734±0.066明显降低,两者比较差异有统计学意义(t=7.780,P＜0.001);(7)NSF和HSF细胞中均发现有Nrf2蛋白表达,且细胞核与细胞质中均有蛋白分布.结论 HSF的氧化应激程度较高,可能是某些原因导致Nrf2含量降低,造成各种抗氧化酶表达降低,最终使活性氧蓄积导致.HSF的增殖和凋亡能力均强于NSF,而活性氧可以导致细胞凋亡,说明氧化应激增强可能是增生性瘢痕的发病机制之一.