表皮细胞体外增殖与增殖表型细胞含量变化规律的实验研究

摘要

目的研究人表皮细胞(human epidermal cells,hECs)体外扩增与增殖表型细胞含量变化规律.方法收集2～3岁健康幼儿包皮共20例,对标本拍照,软件分析照片中标本面积,分离、收集表皮细胞,计算原代(P0)细胞获得率(5例).记录不同代次细胞生长曲线,细胞直径,克隆形成率(5例).对不同代次细胞的角蛋白19(keratm,K19)和外皮蛋白(involucrin)的mRNA表达情况及阳性细胞率分别进行RT-PCR检测(5例)和流式细胞仪(FACS)分析(5例).结果原代细胞平均获得率为(1.64±0.297)×106/cm2.hECs最大可扩增(700±37)倍,第5代(P5)的扩增倍数为(243±13)倍.P0克隆形成率为(45±4)%,随传代依次降低,至第5代(P5)时为(9±2)%,至第6代(P6)时消失.RT-PCR检测发现K19 mRNA在P5及P5之前表达,P6未见表达;Involucrin各代均表达.FACS检测各代hECs中K19阳性细胞百分率逐渐降低,P0时为(66.97±3.14)%,P6为(4.65±1.38)%;外皮蛋白表达阳性细胞百分率逐渐增高,P0时为(11.65±1.62)%,P6为(97.03±2.66)%.结论体外扩增至第5代的幼儿包皮来源的表皮细胞,维持着增殖细胞表型,符合组织工程表皮种子细胞的要求.表皮细胞体外扩增能力逐渐降低与增殖表型细胞含量减少有关.