不同培养条件对人增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响

摘要

目的 探讨不同培养条件对人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblast,HSF)生物学活性的影响.方法 体外常规培养人HSF.取第4～6代细胞按随机数字表法分为10％氧体积分数+标准培养基(对照组)、7％氧体积分数+70％浓度的标准培养基(实验组1)、4％氧体积分数+40％浓度的标准培养基(实验组2)、1％氧体积分数+10％浓度的标准培养基(实验组3),每组样本数均为4.先将各组成纤维细胞用10％ 氧体积分数+标准培养基培养48 h后,再采用不同培养条件分别培养.应用噻唑蓝法、流式细胞术和钙依赖磷脂结合蛋白异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法、羟脯氨酸试剂盒,蛋白质印迹法分别检测各组成纤维细胞的细胞活力、S期细胞比例、活细胞比例、胶原合成和转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量.用SPSS 13.0软件对数据进行统计学处理,数据采用单因素方差分析,组内多个均数两两比较采用SNK法.结果 ①对照组、实验组1、实验组2和实验组3细胞活力分别为0.72±0.03、0.79±0.02、0.75±0.02和0.38±0.03,与对照组比较,实验组1细胞活力较高(P<0.05),实验组2差异无统计学意义(P>0.05),实验组3细胞活力较低(P<0.05).组内整体比较差异有统计学意义(F=163.32,P<0.01).②上述4组胶原合成水平分别为0.42±0.01、0.56±0.01、0.48±0.01和0.31±0.01,与对照组比较,实验组1和实验组2胶原合成水平含量均较高(P<0.05),实验组3的胶原合成水平较低(P<0.05).组内整体比较差异有统计学意义(F=357.69,P<0.01).③上述4组S期比例分别为(19.40±0.37)％、(22.83±0.28)％、(20.94±0.38)％和(14.54±0.21)％,与对照组比较,实验组1 S期比例较高(P<0.05),实验组2 S期比例差异无统计学意义(P>0.05),实验组3 S期比例较低(P<0.05).组内整体比较差异有统计学意义(F=264.37,P<0.01).④上述4组TGF-β1含量水平分别为1.01±0.01、1.58±0.03、1.25±0.02和0.62±0.02,与对照组比较,实验组1和实验组2 TGF-β1含量水平均较高(P<0.05),实验组3 TGF-β1含量水平较低(P<0.05).组内整体比较差异有统计学意义(F=1978.47,P<0.01).⑤上述4组活细胞比例分别为(96.21±0.29)％、(96.61±0.24)％、(96.61±0.17)％和(95.36±0.15)％,与对照组比较,实验组1和实验组2活细胞比例差异均无统计学意义(P>0.05),实验组3的活细胞明显降低(P<0.05).组内整体比较差异有统计学意义(F=12.38,P<0.01).结论 轻度的低氧与低营养底物可增加成纤维细胞的生物学活性,随着氧与营养底物浓度的下降,成纤维细胞的生物学活性逐渐降低.重度的低氧与低营养底物不但能够抑制成纤维细胞的生物学活性,还可促进成纤维细胞凋亡.