激光共聚焦显微成像技术对亚细胞位点光动力损伤的动态观察

摘要

目的探讨应用激光共聚焦显微成像技术对光动力效应所致亚细胞位点损伤进行动态观察的可行性. 方法实验分为HMME+Rhodamine-123组、单加HMME组、单加Rhodamine-123组和单纯细胞组,后3组作为对照组.传代培养鼠肺毛细血管内皮细胞,将血卟啉单甲醚(HMME)与内皮细胞共同孵育24 h后,加入细胞探针Rhodamine-123对线粒体进行染色.应用激光共聚焦显微镜并采用细胞器-细胞荧光强度比值法对HMME进行亚细胞定位,随后采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列. 结果 HMME+Rhodamine-123组的Rhodamine-123荧光图像在光照过程中逐渐发生变化:典型的线粒体形态特征逐渐消失,并伴有荧光强度下降,荧光在胞浆内趋于弥散分布,细胞核内出现Rhodamine-123的荧光;而单加Rhodamine-123组的Rhodamine-123荧光图像未发生明显变化. 结论应用激光共聚焦显微成像技术能实现亚细胞水平光敏损伤位点的动态光学检测,线粒体和核膜可能是HMME介导的光动力损伤亚细胞位点.