制附子水提物的生物活性限值测定研究

摘要

cqvip:目的研究不同来源附子水提物对大鼠心肌细胞H9c2毒性的影响,探讨其毒性剂量限值及其检测限,拟从生物活性层面对附子进行质量控制。方法由中国中药有限公司提供4个批次的附子水提物,批号分别为:HSPYN、HSPSXHZ、HSPSCJY和HSPSCJY1。首先对细胞试验条件进行优化,并从附子水提物抑制心肌细胞活力的量效关系、精密度、重复性等方面进行考察。以CCK-8法测定H9c2心肌细胞的生长曲线,确定优选的细胞密度及药物作用时间;确定附子水提物影响心肌细胞活力的量效曲线,确定药物作用的限值。对不同来源的4批附子药材水提物进行毒性评价,找出附子水提物剂量限值及抑制H9c2细胞活力的检测限。结果在不同细胞种植密度条件下,H9c2细胞在0~48 h为增殖期,48~60 h到达平台期,60~72 h进入衰亡期;选用0.5×10^5/mL细胞密度种植于96孔板,药物作用12 h作为实验条件;批号为HSPYN的附子水提物浓度范围在15.6、31.3、62.5、125.0μg·mL^-1条件下,对H9c2细胞毒性可呈现一定的量效关系,抑制率分别为24.5±3.4%、26.9±6.2%、27.3±8.8%和39.5±11.3%。阳性对照药选择新乌头碱(10^0μg·mL^-1),抑制率范围在24.6%~32.4%。通过对4个批次附子水提物抑制心肌细胞活性的精密度及重复性进行考察,确定了药物浓度在15.6μg·mL^-1其抑制率稳定在21.4±1.9%范围内。结论结合附子的临床功能主治及毒副作用,采用附子抑制心肌细胞活力的效应作为生物活性评价指标,在本研究确定的试验条件下,确定15.6μg·mL^-1可作为限值剂量。在该限值浓度下对大鼠心肌H9c2细胞活力抑制率为20%~24%,可判定为质量合格。