吉西他滨和髓细胞白血病基因1小干扰RNA纳米药物的制备和表征

摘要

目的 研究利用生物相容性的磷脂-阳离子聚合物(LENP)混合型纳米载体共同递送吉西他滨(Gem)和髓细胞白血病基因1(MCL-1)小干扰RNA(siRNA)(siMCL-1),制备治疗胰腺癌的纳米药物LENP-Gem-siMCL-1.方法 用复乳法合成LENP-Gem-siMCL-1核心,Gem包裹在亲水性核心,表面正电荷通过静电吸附siRNA;核心外面的磷脂层通过超声薄膜法进行自组装.纳米粒度及Zeta电位分析仪测量纳米颗粒的粒径分布和表面电位;透射电镜观察纳米颗粒的内部结构;高效液相色谱测量纳米载体对Gem的包封率;激光共聚焦显微镜观察胰腺癌细胞PANC-1对LENP-羧基荧光素(FAM)-siMCL-1的摄取,Western印迹法检测PANC-1细胞中MCL-1蛋白表达水平.以LENP-Gem-siMCL-1(Gem终浓度为32μmol·L-1)与胰腺癌PANC-1和BxPC-3细胞培养48 h,MTT法测定细胞存活率.结果 制备的纳米药物LENP-Gem-siMCL-1为结构和大小分布均匀的球形粒子,具有典型的核壳结构,粒径约200 nm,表面电位为-22.6 mV.Gem的包封率达到24.6％.siMCL-1可以被LENP有效输送至PANC-1细胞.与LENP对照组相比,LENP包裹的siMCL-1在PANC-1细胞中将MCL-1蛋白表达显著降低至57.7％;与生理盐水对照组相比,裸siMCL-1组未发现明显下调.LENP-Gem-siMCL-1对PANC-1和BxPC-3细胞存活均具有明显的抑制作用,LENP-Gem-siMCL-1组和LENP-Gem-siControl组PANC-1细胞存活率分别为42.7％和58.9％(P<0.01),BxPC-3细胞存活率分别为34.0％和86.5％(P<0.01).结论 磷脂-聚合物混合型纳米载体LENP可同时递送Gem和siMCL-1.LENP-Gem-siMCL-1体外明显抑制胰腺癌细胞生长,显示出良好的抗肿瘤作用.