肝细胞生长因子预处理对过氧化氢诱导大鼠神经干细胞凋亡的保护作用

摘要

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对神经干细胞(NSC)凋亡的保护作用及其作用机制,为HGF用于NSC移植提供实验基础.方法 分离培养大鼠NSC.细胞分为正常对照、模型(H2O2 100 μmol·L-1)、HGF+H2O2(HGF 15, 30及60 μg·L-1预处理24 h后,再加入H2O2 100 μmol·L-1处理4 h),LY294002(PI3K/Akt通路抑制剂)+HGF+ H2O2(先加入LY294002 20 μmol·L-1处理30 min,再加入HGF 60 μg·L-1处理24 h,最后再加入100 μmol·L-1 H2O2培养4 h)组.MTT法检测细胞存活率;TUNEL法检测细胞凋亡率;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性;Western印迹分析Bcl-2, Bax蛋白表达.结果 MTT检测发现,随着HGF浓度的增加,NSC细胞的存活率也增加.与模型组[(63.5±2.4)%]比较,HGF 15, 30及60 μg·L-1预处理组细胞存活率明显升高[(79.1±7.5)%,(83.8±6.1)%和(86.6±8.2)%;n=3,P<0.05].TUNEL法检测发现,HGF预处理组凋亡细胞明显减少,模型组的凋亡率为(43.5±6.2)%,HGF预处理组则分别为(34.2±8.6)%,(21.7±3.8)%及(19.4±4.0)%.Caspase-3活性检测表明,与模型组相比,HGF预处理组细胞caspase-3活性降低.Western印迹分析结果显示,与模型组比较,HGF预处理使细胞的Bcl-2蛋白表达升高,但Bax蛋白表达不受影响;HGF的抗凋亡效应可被PI3K/Akt通道阻滞剂LY294002阻断.结论 HGF可减轻H2O2所诱导的大鼠NSC凋亡,且呈一定的浓度依赖关系, 其作用机制可能与NSC的PI3K/Akt通路激活和Bcl-2表达增强有关.