灵芝多糖肽对培养乳大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

摘要

目的 研究灵芝多糖肽(GLPP)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用.方法 用出生1～3d的SD乳大鼠进行心肌细胞原代培养,取培养3～4d的心肌细胞分为正常对照组、H/R组和GLPP给药组(12.5,25,50和100 mg· L-1).MTT法检测细胞存活率;电镜检测细胞形态改变和线粒体损伤;用Annexin V-FITC/PI双标记细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率;以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙离子荧光强度变化;以活性氧(ROS)敏感的荧光探针2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)标记细胞,激光共聚焦显微镜下观察ROS含量变化.结果 与正常对照组比较,H/R组细胞存活率降低(P＜0.05);GLPP 12.5,25,50和100 mg· L-1组细胞存活率与H/R组比较明显增加(P＜0.01).与正常对照组比较,H/R组可见线粒体损伤,GLPP给药组可以减轻线粒体损伤.流式细胞仪检测结果表明,与正常对照组比较,H/R组细胞凋亡率增加(P＜0.01);GLPP组与H/R组比较细胞凋亡率明显减小(P＜0.01).与正常对照组比较,H/R组[Ca2+]i增加,细胞内ROS含量增高(P＜0.01);与H/R组比较,GLPP给药组细胞[Ca2+]i减少,细胞内ROS含量降低(P＜0.01).结论 GLPP对H/R损伤的乳大鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与减少细胞内自由基含量和减轻细胞内钙超负荷有关.