用于耐药肿瘤细胞代谢组学的细胞内核苷类组分离子对色谱分析法

摘要

目的:建立测定K562及K562/A细胞内核苷类代谢物含量的高效液相色谱法,用于两者代谢组学研究.方法:采用1.2 mol·L-1HClO4沉淀蛋白,用苯硼酸柱进行固相萃取富集样品中的核苷酸.色谱柱为汉邦C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相由两种缓冲液组成,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1.A相缓冲液含10 mmol·L-1四丁基氢氧化铵,10 mmol·L-1KH2PO4及0.25%甲醇,pH7.0;B相缓冲液含5.6 mmol·L-1四丁基氢氧化铵,50 mmol·L-1KH2PO4及30%甲醇,pH7.0.柱温25℃,检测波长260 nm.结果:各种核苷类代谢物分离良好,内源性物质无干扰,K562及K562/A细胞内核苷类代谢物平均回收率分别为88.3%～109.2%、84.5%～115.6%.结论:该法简便及重现性好,可同时测定肿瘤细胞中核苷、单核苷酸、二核苷酸及三核苷酸含量.分析结果表明,K562与K562/A细胞核苷类代谢物组存在明显差异.