COL1A1基因启动子区突变（-106C＞T）对其表达的影响

摘要

目的探讨COL1A1基因启动子区突变（-106C＞T）对其表达的影响。方法 PCR扩增正常人COL1 A1基因转录起始点上游-1024～+36 bp的启动子序列,片段长度为1060 bp。经T/A克隆,连接酶切位点,再连接到PGL3-basic载体,得到野生型的PGL3-COL1A1表达载体。再采用定点突变的方法,把-106位碱基的C突变成T,再连接到PGL3-basic载体,构建突变型的PGL3-COL1A1表达载体。用上述两种表达载体及PGL3-basic分别瞬时转染NIH 3T3细胞。细胞培养48 h后,测定各组细胞表达的荧光素酶的相对活性,以明确COL1A1启动子区-106位碱基C＞T突变对基因转录调控的影响。结果经琼脂糖凝胶及基因测序鉴定,证实载体构建成功。荧光素酶活性测定结果显示,在转染野生型PGL3-COL1A1表达载体的细胞组,荧光素酶的相对活性为3.8665,为阴性对照组（PGL3-basic）的4.8倍;转染突变型PGL3-COL1A1表达载体的细胞组,荧光素酶的相对活性为1.3917,为阴性对照组的1.7倍。COL1A1基因启动子-106位碱基C＞T突变后,其转录活性较野生型降低了64%。结论 COL1A1基因启动子区-106C＞T突变可以在转录水平抑制该基因的表达。