甘油葡糖苷在增强COL1A1基因和/或ELN基因表达水平中的应用

摘要

本发明提供甘油葡糖苷在增强COL1A1基因和/或ELN基因表达水平中的应用，具体涉及甘油葡糖苷或包含甘油葡糖苷的组合物在制备增强COL1A1基因和/或ELN基因表达的产品中的应用。甘油葡糖苷能够有效提升COL1A1基因和/或ELN基因的表达量，使其相对表达倍数可提升1.3倍以上。

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及甘油葡糖苷在增强COL1A1基因和/或ELN基因表达水平中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

随着年龄的增长，真皮结构会逐渐混乱，导致皮肤紧致度和张力下降，其主要体现在面部和身体的轮廓逐渐消失，胸部和颈部的皱纹逐渐显现。皮肤保湿以及保持皮肤活力对于减缓上述过程尤为重要。

甘油葡糖苷(Glyceryl Glucoside，GG，CAS号：22160-26-5)是一类由甘油分子和葡萄糖分子通过糖苷键连接而形成的糖苷类化合物，其中具有重要生理功能的结构为2-α构型，研究证明其主要有皮肤保湿、预防龋齿、α-葡萄糖苷酶抑制剂及有助于大分子稳定、抑制脂肪细胞内中性脂的累积、抗过敏及抗癌等重要生理功能，在相关领域的应用潜力巨大。尤其，甘油葡萄糖苷拥有优异的保湿能力，有文献证明甘油葡萄糖苷可显著提高水通道蛋白AQP3的表达，而AQP3蛋白在皮肤上皮细胞的保水功能中发挥重要作用。同时有研究证明甘油葡萄糖苷拥有良好的皮肤渗透性，能有效减少水分流失，目前甘油葡萄糖苷已收录至由国家食品药品监督管理总局发布的2015版《已使用化妆品原料名称目录》中，收录名称为“甘油葡糖苷(Glycerylglucoside)”，序号02461。众多化妆品和保健品中选择加入甘油葡糖苷作为活性成分以应用其良好的保湿和渗透功能，提升皮肤或身体的状态。

发明内容

本发明对甘油葡糖苷进行了基因层面的研究，并提供了甘油葡糖苷在增强COL1A1基因和/或ELN基因表达中的应用，以及采用甘油葡糖苷诱导提升COL1A1基因和/或ELN基因表达的方法。

具体地，本发明提供了下述的技术特征，以下技术特征的一个或多个的结合构成本发明的技术方案。

在本发明的第一方面，本发明提供了甘油葡糖苷或包含甘油葡糖苷的组合物在制备增强COL1A1基因和/或ELN基因表达的产品中的应用。

在本发明的一些实施方式中，所述包含甘油葡糖苷的组合物中，可以包含其他具有协同作用或相加作用的活性成分和/或对活性发挥完全没有影响的助剂成分比如溶剂(例如水)；或者，所述包含甘油葡糖苷的组合物中有且仅以甘油葡糖苷为唯一有效成分，这样的组合物比如甘油葡糖苷水溶液。在本发明的一些实施方式中，组合物中甘油葡糖苷为0.05-0.75％(W/W)，尤其为0.1-0.25％(W/W)。甘油葡糖苷含量过低并不发挥效果，而含量过高也可能会发生不好的影响。

需要说明的是，当做为医药用途、医美用途或者食品保健用途使用时，需注意COL1A1基因和/或ELN基因表达量并非越高越好，因而，如果组合物中含有与甘油葡糖苷具有相加或者相协同的功能成分时，可在本发明披露的含量的基础上调整用量。因而，在本发明的实施方式中，所述包含甘油葡糖苷的组合物中有且仅以甘油葡糖苷为唯一有效成分时，效果更为可控。在本发明的实施方式中，甘油葡糖苷能够提升COL1A1基因和/或ELN基因的表达量，COL1A1基因的相对表达倍数在1.3倍以上，ELN基因的相对表达倍数在1.6倍以上。

其中，当甘油葡糖苷为0.05-0.75％(W/W)时，对于COL1A1基因和/或ELN基因的表达提升具有更为显著的影响，尤其在甘油葡糖苷为0.1-0.25％(W/W)时，COL1A1基因的相对表达倍数可稳定在1.5倍以上，ELN基因的相对表达倍数可稳定在1.7倍以上。比如，在本发明的一些较为具体的实施方式中，当甘油葡糖苷为0.05％(W/W)时，COL1A1基因的相对表达倍数可达1.3倍，ELN基因的相对表达倍数可达1.67倍；在本发明的一些实施方式中，当甘油葡糖苷为0.19％(W/W)时，COL1A1基因的相对表达倍数可达1.52倍，ELN基因的相对表达倍数可达1.75倍；当甘油葡糖苷为0.75％(W/W)时，COL1A1基因的相对表达倍数可达1.47倍，ELN基因的相对表达倍数可达1.54倍。当然，在本申请的实施方式中，甘油葡糖苷的含量并非越高越好，比如在一些实验中，发明人发现当含量进一步增高时，ELN基因的表达量的提升程度会首先发生降低，且降低的幅度较为明显。

在本发明的一些实施方式中，甘油葡糖苷的作用时间应不低于24h，较适宜的作用时间为48-72小时，尤其作用72小时时，效果最为显著。

在本发明的一些实施方式中，所述产品可以为医药品、试剂、化妆品或保健品。在一些实施方式中，所述产品以甘油葡糖苷为唯一有效成分，或者，在包含甘油葡糖苷的同时还可以包括目前已知的其他能够提升COL1A1基因和/或ELN基因表达量的成分(前提是这些成分与甘油葡糖苷具有协同作用或相加作用而不会产生不良影响)或者对活性发挥完全没有影响的成分，比如赋形剂、溶剂等助剂。

在本发明的一些实施方式中，所述产品中葡糖苷为0.05-0.75％(W/W)，尤其为0.1-0.25％(W/W)。

在本发明的第二方面，本发明提供了甘油葡糖苷包含甘油葡糖苷的组合物在制备用于治疗或改善与COL1A1基因和/或ELN基因表达相关的疾病的药物中的应用。

其中，所述治疗或改善通过增强COL1A1基因和/或ELN基因的表达实现。

在本发明的一些实施方式中，所述包含甘油葡糖苷的组合物中，可以包含其他具有协同作用或相加作用的活性成分和/或对活性发挥完全没有影响的助剂成分比如溶剂(例如水)；或者，所述包含甘油葡糖苷的组合物中有且仅以甘油葡糖苷为唯一有效成分，这样的组合物比如甘油葡糖苷水溶液。在本发明的一些实施方式中，组合物中甘油葡糖苷为0.05-0.75％(W/W)，尤其为0.1-0.25％(W/W)。甘油葡糖苷含量过低并不发挥效果，而含量过高也可能会发生不好的影响。

需要说明的是，当做为医药用途使用时，需注意COL1A1基因和/或ELN基因表达量并非越高越好，因而，如果组合物中含有与甘油葡糖苷具有相加或者相协同的功能成分时，可在本发明披露的含量的基础上调整用量。

在本发明的第三方面，本发明提供了一种试剂盒，其包含甘油葡糖苷，其用于增强COL1A1基因和/或ELN基因的表达。在一些实施方式中，试剂盒中的有效成分有且仅包含甘油葡糖苷，甘油葡糖苷为0.05-0.75％(W/W)。

在本发明的第四方面，本发明提供了一种增强COL1A1基因和/或ELN基因表达的方法，所述方法包括采用甘油葡糖苷诱导基因的表达。

在本发明的一些实施方式中，甘油葡糖苷为0.05-0.75％(W/W)，诱导作用时间不低于24小时，甘油葡糖苷尤其为0.1-0.25％(W/W)，效果更显著。

本发明中所述的甘油葡糖苷若未进行特殊说明均由CN201811096218.6记载的方法获得，属于天然来源，为2α构型。

在本发明的一些实施方式中，甘油葡糖苷以含有甘油葡糖苷的DMEM(一种氨基酸和葡萄糖的培养基，适合人真皮成纤维细胞生长)培养基为试药。其中，在本发明的一些实施方式中，试药的配制方法包括：配制甘油葡糖苷水溶液将DMEM培养基粉末溶解，得到含有甘油葡糖苷的DMEM培养基，然后使用DMEM培养基调配甘油葡糖苷的含量至测试含量。本领域常规使用的DMEM培养基即可，以粉末型使用较为方便。

在本发明的一些实施方式中，本发明采用体外实验的方法，测试了采用甘油葡糖苷诱导人真皮成纤维细胞(HDFn)中COL1A1基因和/或ELN基因的表达情况，其中，甘油葡糖苷0.05-0.75％,W/W，诱导作用时间不低于24小时。其中，甘油葡糖苷采用其水溶性样品将DMEM培养基溶解，并配制成0.05-0.75％(W/W)的梯度，以含有0.05-0.75％(W/W)甘油葡糖苷的DMEM培养基作为试药与HDFn共同培养。结果表明甘油葡糖苷能够同时提高HDFn细胞的COL1A1表达量和ELN表达量，且与阴性对照相比具有统计学差异(p<0.05)。

通过上述技术手段，可实现以下有益效果：

本发明研究证明了甘油葡糖苷具有增强COL1A1基因和/或ELN基因表达的作用，且在0.05-0.75％(W/W)，作用时间不低于24小时的情况下，使COL1A1基因的相对表达倍数在1.3倍以上，ELN基因的相对表达倍数在1.6倍以上。甘油葡糖苷可用于制备具有相关作用的医药品、试剂、化妆品或保健品。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为样品(中科蓝智甘油葡糖苷)对COL1A1相对表达倍数的影响；*：与阴性对照相比，p<0.05；**：与阴性对照相比，p<0.01。

图2为样品(中科蓝智甘油葡糖苷)对ELN相对表达倍数的影响；*：与阴性对照相比，p<0.05；**：与阴性对照相比，p<0.01。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。本发明所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本发明所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

文中术语“和/或”，仅仅是一种描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，单独存在B，同时存在A和B三种情况，本文中术语“/和”是描述另一种关联对象关系，表示可以存在两种关系，例如，A/和B，可以表示：单独存在A，单独存在A和B两种情况，另外，本文中字符“/”，一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。

本文使用的术语仅用于描述特定实施例，并且不意在限制本发明的示例实施例。如本文所使用的，单数形式“一”、“一个”以及“该”意在包括复数形式，除非上下文明确指示相反意思。还应当理解术语“包括”、“包括了”、”包含”、和/或“包含了”当在本文中使用时，指定所声明的特征、整数、步骤、操作、单元和/或组件的存在性，并且不排除一个或多个其他特征、数量、步骤、操作、单元、组件和/或他们的组合的存在或增加。

应当理解，尽管在本发明可能采用术语第一、第二、第三等来描述各种信息，但这些信息不应限于这些术语。这些术语仅用来将同一类型的信息彼此区分开。例如，在不脱离本发明范围的情况下，第一信息也可以被称为第二信息，类似地，第二信息也可以被称为第一信息。取决于语境，如在此所使用的词语“如果”可以被解释成为“在……时”或“当……时”或“响应于确定”。

此外，特定特征、结构、功能或特性可以以任何适合的方式组合到一个或多个实施例中。例如，第一实施例可以结合第二实施例，只要与这两个实施例相关联的特定特征、结构、功能或特性不互相排斥。

1、实验材料：

人真皮成纤维细胞(HDFn)购自ATCC。

主要试剂：PBS、DMEM培养基、胎牛血清、FM培养基、

主要仪器：CO

测试样品：

受试物为甘油葡糖苷，购自青岛中科蓝智生物科技发展有限公司。

样品为受试物5％(W/W)的水溶性样品。用样品溶液(水溶液)将DMEM培养基粉末溶解，得到含5％受试物的培养基，然后用DMEM培养基将样品中的受试物配制成表1所示含量，过滤除菌后进行COL1A1基因和ELN基因相对表达量检测试验。

同时以不含受试物的上述样品作为对照。

表1相关基因相对表达量测试样品含量设计表

2、试验方法：相关基因相对表达量检测试验

收集对数生长期细胞，按照细胞密度为2.4×10

加药后在培养箱(37℃，5％CO

COL1A1和ELN的相对表达倍数＝2

3、试验结果：

相关基因相对表达量检测结果：

原始数据见表2，测试结果分析见表3-4和图1、图2。

表2 COL1A1和ELN基因相对表达量原始数据(Ct)

表3 COL1A1相对表达倍数结果分析

表4 ELN相对表达倍数结果分析

结论，样品(甘油葡糖苷)在0.05-0.75％(W/W)下作用超过24h即可发挥作用，在作用72h，能够提高HDFn细胞的COL1A1表达量和ELN表达量，且与阴性对照相比具有统计学差异(p<0.05)，但需要注意的是，随着样品含量的进一步提升，表达水平尤其对于ELN基因的表达的提升程度会出现明显的降低现象，而这种降低在对于COL1A1基因的表达提升上在进一步提高的样品含量中也有发生。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。