HRM分析筛查成骨不全一家系COL1A1基因突变

摘要

目的:应用高分辨率熔解曲线(HRM)分析筛查成骨不全(OI)一家系COL1A1基因突变位点,并分析基因型与临床表型的相关性.方法:收集成骨不全一家系的临床资料,采集先证者、随诊家属及50例正常对照的血液标本,应用HRM分析筛查先证者及正常对照血液标本COL1A1基因突变,并利用基因测序验证.结果:HRM分析显示,先证者,在COL1A133-34外显子结果异常,其Tm为87.7℃,正常对照Tm为87.9℃±0.06℃,比正常对照低0.2℃,先证者与正常对照标准化曲线及差异曲线比较有明显差异,先证者测序结果为,c.2321delC,即位于COL1A1基因33-34外显子,cDNA的2321位点丢失一个碱基C,导致移码突变,使774位氨基酸由脯氨酸(Pro)变成亮氨酸(Leu),在此后的第333位氨基酸处提前出现终止密码子(UAA),即p.Pro774Leufs*333.先证者的父亲及祖父均患有OI,经基因测序验证,具有相同的突变位点,均为杂合突变.而50例正常对照无此突变.该突变在人类胶原突变数据库中,未见报道,是一个新突变.家系图谱显示为常染色体显性遗传.先证者及家系患者的临床诊断分型为I型,仅先证者下肢轻度畸形.移码突变导致提前形成终止密码子,Ⅰ型胶原合成数量减少,临床表型较轻.结论:HRM分析能准确筛出OI的COL1A1基因突变,操作简便、快速,成本较低,是一种有效的OI基因筛查新方法.COL1A1基因突变c.2321delC,为新的突变位点.患者的基因型与临床表型具有相关性。