杜鹃素通过增强Kv1.5和Kv2.1表达抑制尼古丁所致的肺动脉平滑肌细胞增殖

摘要

目的:研究杜鹃素(farrerol,Far)对尼古丁所致的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery vascular smooth muscle cells,PASMCs)增殖的作用,并进一步探讨其与电压依赖性钾通道(voltage-dependent potassium chan-nels,Kv)1.5和Kv2.1的关系.方法:首先应用细胞计数法检测不同浓度尼古丁对PASMCs细胞数量的影响,筛选出最适的尼古丁浓度.将PASMCs随机分为5组,分别为:正常对照组、尼古丁(1μmol/L)组、尼古丁(1μmol/L)+低浓度(10-6 mol/L)、中浓度(10-5 mol/L)和高浓度(10-4 mol/L)Far组.利用细胞凋亡试剂盒检测细胞caspase-3活性,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率.并进一步应用RT-qPCR和Western blot法分别检测各组细胞Kv1.5和Kv2.1及凋亡相关因子Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白水平.结果:细胞计数结果显示,1μmol/L尼古丁能最大限度地增加PASMCs的数量.1μmol/L尼古丁能显著降低PASMCs的caspase-3活性,并增强细胞活力(P<0.01).杜鹃素(10-6～10-4 mol/L)可浓度依赖性地阻断尼古丁的作用.流式细胞术检测显示,与对照组相比,1μmol/L尼古丁可明显诱导PASMCs增殖,降低其凋亡率;而杜鹃素干预后,PASMCs的凋亡率显著高于尼古丁组(P<0.01).RT-qPCR和Western blot检测结果显示,1μmol/L尼古丁显著抑制PASMCs Kv1.5、Kv2.1和Bax的表达,增加Bcl-2的表达;10-5μmol/L杜鹃素可以显著逆转尼古丁对PASMCs的作用(P<0.01).结论:杜鹃素能够对抗尼古丁所引起的大鼠PASMCs caspase-3和Bax抑制及Bcl-2增强,该作用与促进Kv1.5和Kv2.1表达有关.