腺病毒介导的EGFP基因在大鼠骨髓间质干细胞中的高效表达

摘要

目的:研究复制缺陷型腺病毒感染骨髓间质干细胞介导外源基因表达的可行性及感染效率.方法:在体外低密度扩增大鼠骨髓间质干细胞(rMSC), 用细菌同源重组法构建巨细胞病毒(CMV)驱动的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因腺病毒载体(pAd-EGFP), 用293包装细胞制备腺病毒,用EGFP重组腺病毒感染rMSC,观察重组腺病毒携带基因在MSC中的感染和表达情况,用细胞计数法和流式细胞仪分析感染效率.用血清撤离加入β-巯基乙醇诱导Ad-EGFP感染的rMSC向神经样细胞定向分化.结果:Ad-EGFP可高效感染rMSC, 感染率为(36±2)%, 而脂质体法转染质粒pTrack-GFP在rMSC转染效率非常低且不易成功; Ad-EGFP感染后的不同扩增代数的rMSC在受到β-巯基乙醇的诱导分化后在荧光显微镜下呈典型的突触形式.免疫组化鉴定发现这些诱导细胞表达神经元特异烯醇化酶(NSE), 表明腺病毒介导外源基因转染后rMSC仍具有分化为神经样细胞的潜能. 结论:腺病毒载体具有较高的介导外源基因表达于rMSC的效率,腺病毒载体介导的EGFP基因能够示踪rMSC分化为神经样细胞的过程.