腺病毒介导的心肌营养素-1对大鼠骨髓间充质干细胞神经分化中细胞存活的作用

摘要

目的：观察腺病毒介导的心肌营养素-1 (Adv-EG FP-CT-1)对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)神经分化中细胞存活的影响.方法：全骨髓贴壁筛选法分离培养rBMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面标记性蛋白.将细胞分为以下4组:对照组、Adv-EGFP(重组腺病毒增强型绿色荧光蛋白)转染组、Adv-EGFP-CT-1转染组及诱导剂组,各转染组分别向培养液中加入对应的腺病毒液,转染复数MOI=200.转然后48h,除对照组外,其他各组均予神经分化诱导,于诱导后5h、24h、48h DAPI染色法观察凋亡细胞核形态;流式细胞术检测细胞的早期凋亡率.于诱导后5h、3d、7d相差显微镜下观察细胞存活情况;台盼蓝染色法检测细胞存活率.结果:诱导处理后，CT-1组及对照组，细胞核大部分为淡蓝色圆形或椭圆形，而空病毒组及诱导剂组细胞核出现染色质聚集、固缩，见较多凋亡细胞核;诱导后各时间点，CT-1组及对照组早期凋亡率较空病毒组及诱导剂组明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)，各时间点对照组与CT-1组差异无统计学意义(P>0.05);空病毒组及诱导剂组差异无统计学意义(P>0.05);同时，各组细胞随时间的延长均有凋亡，且差异有统计学意义(P<0.05)。诱导后不同时间点，CT-1组及对照组存活率均高于空病毒组及诱导剂组，差异有统计学意义(P<0.05);不同时间点各组与对照组比较，存活率均低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05);各时间点空病毒组及诱导剂组差异无统计学意义(P<0.05);同时，各组细胞随时间的延长均出现死亡，差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CT-1可以维持旧MSCs神经分化过程中细胞的存活。