人CYP450 2E1异源性表达模型的建立及底物的表达诱导作用

摘要

目的:探讨化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)对人CYP2E1异源表达的诱导作用.方法: 脂质体介导法将外源人CYP2E1 cDNA导入NIH 3T3细胞,G418筛选后挑取克隆,Southern blot鉴定外源基因的整合,用不同浓度乙醇和DNP处理阳性克隆,RT-PCR和Western blotting检测各组细胞CYP2E1表达水平.结果:获得二个具有外源基因CYP2E1 cDNA整合及稳定表达的细胞克隆;随着乙醇和DNP处理浓度的提高,细胞CYP2E1 mRNA和蛋白质水平的表达增强. 结论: DNP与乙醇能稳定诱导CYP2E1异源表达,其作用可能与其mRNA转录增强有关;DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关.