重组小鼠质粒pEGFP - NGB的构建和在培养神经胶质细胞中表达的实验研究

摘要

目的:构建重组小鼠质粒pEGFP-NGB并研究其在培养神经胶质细胞中的表达.方法:采用RT-PCR从小鼠脑组织总MA中扩增出该基因的全序列cDNA,并克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-NGB表达载体.采用GeneJamer转染试剂和pEGFP-NGB重组子混合后转染至培养神经胶质细胞中,观察NGB在培养神经胶质细胞中mRNA以及蛋白表达.结果:阳性克隆测序结果显示所测序列与Genbank序列一致.RT-PCR和Western-blot结果表明转染重组质粒pEGFP-NGB培养神经胶质细胞NGB mRNA和蛋白均有较高的表达.荧光显微镜下观察发现,培养神经胶质细胞中有较多绿色荧光蛋白表达.结论:(1)成功构建pEGFP-NGB重组子;(2)构建的pEGFP-NGB重组子可在培养神经胶质细胞中表达.