细胞因子对HLA-B27启动子的调节作用及其在强直性脊柱炎发病机制中的意义

摘要

目的:构建含HLA-B27启动子的HeLa稳定转染细胞株,观察7种细胞因子对HLA-B27启动子及其上游NF-κB及ISRE顺式作用元件活性的调节作用,探讨强直性脊柱炎(AS)等B27相关疾病的发生机制.方法:转染HeLa细胞,抗生素筛选单克隆构建含HLA-B27启动子的稳定转染细胞株.构建HeLa-B27稳定细胞株和HeLa-NF-κB稳定细胞株,在瞬时转染pISRE-luc的HeLa细胞中加入白细胞介素1α(IL-1α)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素γ(IFN-γ)和转化生长因子β(TGF-β),观察7种细胞因子对B27启动子及其上游NF-κB和ISRE作用元件的调节作用.另外在HeLa-B27稳定细胞株培养液中同时加入3种细胞因子单克隆抗体和相应细胞因子,观察其对启动子活性的调节作用.结果:TNF-α、IFN-α、IFN-β和IFN-γ均能明显增强HeLa细胞B27启动子活性.细胞培养96 h后,IFN-β为最强的启动子诱导剂(5.4倍,P＜0.05);细胞培养8 h内,TNF-α、IL1-α和IL1-β,可诱导NF-κB的活性增加30倍左右(P＜0.05),IFN-α和IFN-β可诱导ISRE的活性增加12倍左右(P＜0.05),抗TNF-α抗体对于Ⅰ类IFN增加的B27启动子活性没有明显的抑制作用.结论:TNF-α和IFN可通过结合于B27启动子中各种转录因子结合元件调控HLA-B27启动子的转录活性,IFN-β可能在强直性脊柱炎等B27相关的脊柱关节病的发病机制中起着重要作用.