VEGF_(165)真核表达载体的构建及其对白血病细胞增殖和化疗药物敏感性的影响

摘要

目的:构建血管内皮细胞生长因子的真核表达载体,探讨其对白血病细胞的增殖以及化疗药物敏感性的影响.方法:应用常规基因克隆方法构建pEGFP-C1-hVEGF_(165)真核表达载体,转染白血病细胞K562,采用CCK8法检测重组质粒对细胞增殖的影响,RT-PCR方法检测细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA的表达水平,ELISA方法定量检测细胞培养液和细胞内VEGF蛋白的表达水平,用流式细胞仪检测细胞周期.结果:经酶切鉴定和基因测序证实成功构建了VEGF_(165)真核表达载体.稳定转染pEGFP-C1-hVEGF_(165)的K562细胞较转染pEGFP-C1空质粒的K562细胞增殖加快,VEGF_(165) mRNA表达明显增加,细胞分泌VEGF蛋白水平上调.转染pEGFP-C1-hVEGF_(165)还可以提高白血病细胞在化疗药物高三尖杉酯碱和氟尿嘧啶作用时的细胞存活率.结论:VEGF_(165)真核表达载体可以上调白血病细胞K562的VEGF mRNA和VEGF蛋白的表达水平,从而促进白血病细胞的增殖,同时可以降低白血病细胞对化疗药物高三尖杉酯碱和氟尿嘧啶的敏感性.