HBV adr 亚型体外感染肝细胞模型的建立

摘要

目的: 构建1.1倍乙型肝炎病毒(HBV) 全基因的真核表达载体,稳定转染L-02细胞,建立HBV adr 亚型体外感染的细胞模型.方法: 以pVUⅡ酶切质粒p3.6Ⅱ获得1.1倍HBV DNA 片段,用牛小肠碱性磷酸酶将经EcoR V线性化的pcDNA3去磷酸化,以T4 DNA 连接酶连接1.1倍HBV DNA 片段和线性化的pcDNA3,将构建的pcDNA3-1.1 HBV以脂质体转染L-02肝癌细胞,经G418稳定筛选.ELISA检测转染细胞培养上清中HBsAg、HBeAg的表达.RT-PCR检测转染细胞中HBpreS2、HBX的表达.结果: 成功构建了1.1倍HBV全基因真核表达载体,稳定转染L-02后,建立了新的肝细胞系L-02.1Z,其培养上清中可检测到HBsAg、HBeAg的稳定表达,并可检测到HBpreS2、HBX RNA在转染细胞中表达.结论: 该表达载体可介导病毒复制,其稳定转染的细胞可作为一种新型的HBV体外感染模型.