微滴数字PCR与Super-ARMS PCR检测非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂治疗耐药后血浆游离DNA EGFR基因T790M突变的对比分析

摘要

目的比较微滴数字PCR（ddPCR）与Super-扩增阻滞突变系统（ARMS）法检测表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗后耐药非小细胞肺癌患者血浆中EGFR基因耐药位点T790M突变的差异,并探讨ddPCR的临床应用价值。方法收集同济大学附属上海市肺科医院2017年5至11月间37例经EGFR-TKI治疗后耐药的非小细胞肺癌患者血浆标本;分别采用ddPCR和Super-ARMS法检测血浆标本中EGFR基因T790M突变情况。结果 EGFR-TKI治疗耐药后非小细胞肺癌患者,男性17例,女性20例,年龄范围40～83岁,中位年龄64岁。治疗前,37例患者肿瘤组织均检测出EGFR基因敏感突变,无T790M突变。靶向治疗耐药后,ddPCR检测患者血浆游离DNA EGFR基因T790M突变,阳性率为45. 9%（17/37）,Super-ARMS检测阳性率为35. 1%（13/37）,统计学分析发现,两种方法检测EGFR T790M突变阳性率差异具有统计学意义（P＜0. 05）。13例Super-ARMS法T790M突变病例（△Ct值＜8）,经ddPCR法检测均为阳性;Super-ARMS法10例翘尾病例（△Ct值≥8,T790M突变阴性）,ddPCR法检测显示有3例T790M突变;Super-ARMS法14例完全阴性病例（无ACt值,T790M突变阴性）,ddPCR法检测显示有1例T790M突变弱阳性。ddPCR法检测T790M突变结果与Super-ARMS法检测判读的ACt值之间有显著相关性。在ddPCR检测出的17例T790M阳性的患者中,其中9例患者接受了奥西替尼治疗,7例患者都有良好的获益。结论 ddPCR检测EGFR-TKI治疗耐药后非小细胞肺癌患者血浆EGFR基因T790M突变,比Super-ARMS法具有更高的灵敏度,这可能会在指导临床靶向药物治疗上具有广泛的应用价值。